ATCC 作为全球知名的菌种保藏机构,对提供菌种保藏服务有严格的要求,主要包括以下方面:
机构与人员资质
合法注册的机构:申请保藏服务的单位必须是合法注册的科研机构、企业或其他组织,需提供相关的注册证明文件,如营业执照、组织机构代码证等(高校和研究所一般不需要提供营业执照)。
生物安全资质:保藏机构需要具备相应的生物安全实验室资质。例如,提供所在地卫生健康行政部门颁发的病原微生物实验室生物安全等级证书。如果没有,需填写 ATCC 指定的生物安全实验室资质说明,并加盖单位公章。
专业技术人员:保藏服务需要有专业的技术人员来操作和管理,这些人员应具备微生物学、细胞生物学等相关专业知识,熟悉菌种保藏的技术和流程,并且经过相关的培训和考核。
保藏设施与条件
合适的保藏设备:需要配备液氮罐、冻干机等专业的保藏设备,以满足不同菌种的保藏需求。液氮罐用于超低温保存,能使菌种处于休眠状态,保持其生物学特性;冻干机则用于将菌种制成冻干品,便于长期保存和运输。
稳定的环境条件:保藏场所要保持稳定的温度、湿度和通风条件,避免温度波动、潮湿和空气污染等因素对菌种造成影响。同时,要具备防火、防盗、防鼠等安全措施,确保菌种的安全保藏。
质量检测与监控设备:需要有相应的设备来对保藏的菌种进行定期的质量检测和监控,如显微镜、培养箱、离心机、生化分析仪等,以便及时发现菌种的污染、变异等问题。
材料与文件准备
申请表:填写 ATCC 的新帐户申请表,以英文填写,单位负责人及生物安全负责人签字,并加盖单位红章。
MTA 协议:按照要求签署材料转让协议(MTA),明确规定 ATCC 菌种的使用范围和限制,如只能用于科学研究,不能应用于人体,未经许可不得用于商业用途等。
其他条件
遵守法律法规:保藏机构必须遵守美国以及所在国家或地区的相关法律法规,包括生物安全法规、进出口管制法规等。对于涉及特殊菌种,如生物安全四级(BSL - 4)病原体,还需要申请专门的许可证。
费用支付:需要按照 ATCC 的规定支付相应的保藏费用,费用标准根据菌种的类型、保藏方式和服务内容等因素而定。

ATCC(美国模式培养物集存库)标准菌株的存储条件通常取决于菌株的特性,但一般常见的存储方法和条件如下:
1. 冷冻保存:
- 液氮(-196℃):这是长期保存菌株的常用方法,能最大程度保持菌株的活性和稳定性。
- 超低温冰箱(-80℃):也能有效保存菌株,但保存时间可能相对液氮较短。
2. 低温冷藏:
- 一般在 2 - 8℃的冰箱中,适用于一些短期保存或对温度要求不太高的菌株。
在存储菌株时,通常会使用特定的保护剂,如甘油或脱脂牛奶等,以减少冷冻和复苏过程对菌株的损伤。同时,菌株的保存容器要经过严格的灭菌处理,并且做好标记和记录,包括菌株的名称、编号、保存日期等信息。

评估复合细胞模型稳定性可从细胞特性、功能、分子水平及环境因素等方面进行,以下是具体的评估方法:
细胞特性评估
细胞形态观察:通过显微镜定期观察复合细胞模型中各种细胞的形态。如在肿瘤复合细胞模型中,观察肿瘤细胞与基质细胞的形态是否保持典型特征,有无异常变化,若细胞形态稳定,提示细胞模型在外观上保持稳定。
细胞生长曲线测定:绘制复合细胞模型中各类细胞的生长曲线,连续监测细胞在不同时间点的数量变化。若生长曲线呈现稳定的对数增长期、平台期等特征,且多次重复实验结果相似,说明细胞生长状态稳定,细胞模型在生长特性方面较为稳定。
细胞活力检测:采用台盼蓝染色、MTT 法、CCK - 8 法等检测细胞活力。以 MTT 法为例,在相同培养条件下,定期检测复合细胞模型中细胞的吸光度值,若吸光度值稳定,表明细胞活力稳定,细胞模型整体状态稳定。
细胞功能评估
特定功能检测:依据复合细胞模型的类型和研究目的,检测细胞的特定功能。如在肝脏复合细胞模型中,检测肝细胞的代谢功能,包括对药物、毒素的代谢转化能力;在神经细胞复合模型中,检测神经元的电生理活动,如动作电位的发放等,若这些功能指标在多次检测中保持稳定,说明细胞模型的功能稳定。
细胞间相互作用监测:观察复合细胞模型中不同细胞间的相互作用。例如在肿瘤微环境复合细胞模型中,通过免疫荧光染色等方法检测肿瘤细胞与免疫细胞之间的信号传导分子表达情况,若细胞间相互作用的相关指标稳定,表明细胞模型中细胞间的关系和功能稳定。
分子水平评估
基因表达分析:运用实时定量 PCR、基因芯片等技术检测与细胞功能、表型相关的关键基因表达水平。在心肌细胞复合模型中,检测心肌特异性基因如肌钙蛋白、肌球蛋白等的表达,若这些基因的表达量在一定范围内波动且保持相对稳定,说明细胞模型在基因表达层面稳定。
蛋白质表达检测:采用 Western blotting、免疫组化等方法检测关键蛋白质的表达和定位。在皮肤复合细胞模型中,检测角蛋白、胶原蛋白等蛋白质的表达情况,若蛋白质表达水平和定位稳定,反映出细胞模型在蛋白质水平的稳定性。
环境因素评估
培养条件稳定性:保持培养条件的一致性,包括培养基成分、温度、湿度、气体环境等。定期检测培养箱的温度、二氧化碳浓度等参数,确保其在设定范围内波动,同时监测培养基的 pH 值、营养成分含量等,若培养条件稳定,有助于维持复合细胞模型的稳定性。
批次间一致性:对于多次构建的复合细胞模型,进行批次间的比较分析。检测不同批次细胞模型的细胞特性、功能、分子水平等指标,若各批次间的差异较小,说明细胞模型具有良好的批次间稳定性,可重复性高。


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关键词:ATCC700405微球菌属,ATCC13048产气肠杆菌,ATCC11437产孢梭菌,ATCC10231白色念珠菌