"美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection,ATCC)是全球知名的生物资源中心,以下是对它的详细介绍:
基本信息
成立时间:1925 年由科学家创立,其前身可追溯至 1921 年陆军医学博物馆接收的温斯洛培养物收藏。
性质:是一家私营的、非营利性组织,由美国 14 家生化、医学类行业协会组成的理事会负责管理。
使命:致力于获取、鉴定、生产、保存、开发和分发标准参考微生物、细胞系和其他生命科学研究材料,为全球科研人员提供生物材料和资源,推动生命科学研究的发展。
地址:总部及生物生产设施位于弗吉尼亚州马纳萨斯,食品药品监督管理局注册的生物储存设施和研发中心位于马里兰州盖瑟斯堡。
保藏资源
细胞系:拥有超过 3400 种连续细胞系,涵盖多种物种、组织 / 疾病类型和信号通路,还包括用于癌症研究的肿瘤细胞和分子面板、不同种族和性别的诱导多能干细胞集合等。
微生物:保藏了超过 18,000 株细菌菌株,可用于工业应用、分析方法开发、质量控制和环境研究;3000 多种从各种来源分离的人和动物病毒;代表超过 7600 种的真菌和酵母;分类多样的原生生物,包括寄生原生动物和藻类。
其他:1000 多种基因组和合成核酸,以及经认证的参考材料;500 多种被推荐为质量控制参考菌株的微生物培养物。
主要服务
生物材料供应:向全球科研、工业和教育领域的合格人员提供各种保藏的生物材料,包括细胞系、微生物菌株等。
质量控制服务:其参考材料被美国食品药品监督管理局、美国农业部等机构引用为标准,用于开发治疗和诊断产品、测试食品和环境样品质量、进行准确医学诊断等。
技术服务:提供细胞和微生物培养及鉴定、对照品和衍生物的开发与生产、能力验证、生物材料存放服务等。
教育培训:通过培训项目、讲座、出版物、数据库等方式,向科学家和公众宣传 ATCC 的藏品和活动,传播相关知识。
设施设备
实验室:位于弗吉尼亚州马纳萨斯的设施面积达 126,000 平方英尺,有 35,000 平方英尺的实验室空间,包括用于存放更危险微生物的专用遏制设施。
保藏库:保藏库空间为 18,000 平方英尺,包含 200 个用于储存生物材料的冷冻柜,如 65 个气相液氮冷冻柜、50 个机械冷冻柜,以及用于 4℃-8℃储存的冷藏室。
动物设施:获得美国实验动物护理评估协会的认证,并在美国农业部注册。温室和处理植物病原体的实验室接受州和联邦官员的检查,以确保符合检疫规定。
科研合作:与乔治梅森大学等学术机构合作开展生物信息学等领域的研究,还争取联邦资助和合同,与学术机构及私人公司建立合作关系,推动生命科学研究和技术发展。"

ATCC 菌株的保存方法通常根据菌株的类型和特性有所不同,以下是一些常见的保存方法:
斜面保存法
操作方法:将菌株接种在合适的斜面培养基上,在适宜的温度下培养至生长良好,然后将斜面放入 4 - 8℃的冰箱中保存。
适用菌株:大多数细菌、真菌等菌株都可以采用这种方法保存。
保存期限:一般可保存几个月至一年不等,具体取决于菌株的特性。例如,大肠杆菌等常见细菌菌株在斜面保存条件下,通常能保存 3 - 6 个月。
注意事项:定期观察菌株的生长情况,如发现斜面培养基干燥或菌株有变异迹象,应及时转接新的斜面。
穿刺保存法
操作方法:将菌株用接种针穿刺接种到半固体培养基中,培养后放入 4 - 8℃冰箱保存。
适用菌株:常用于一些厌氧菌或兼性厌氧菌的保存。
保存期限:可保存半年至一年。
注意事项:穿刺时要注意深度和速度,避免破坏培养基的结构。保存过程中要防止培养基干裂。
甘油冷冻保存法
操作方法:将培养好的菌株悬浮在含有一定浓度甘油(通常为 15% - 30%)的保护液中,分装到无菌的冻存管中,然后放入 - 20℃或 - 80℃的低温冰箱中保存。
适用菌株:适用于大多数微生物菌株,包括细菌、真菌、酵母菌等。
保存期限:可保存数年。例如,一些常见的工业生产菌株用甘油冷冻保存法在 - 80℃下可保存 5 - 10 年。
注意事项:甘油浓度要准确,过高或过低都会影响菌株的存活率。冻存和复苏过程要缓慢进行,避免冰晶对菌株造成损伤。
冷冻干燥保存法
操作方法:将菌株制成菌悬液,加入保护剂(如脱脂乳、蔗糖等),然后在低温下冷冻,再通过真空干燥除去水分,使菌株处于干燥状态,最后密封保存。
适用菌株:适用于各种微生物菌株,尤其适用于一些对干燥和低温有较好耐受性的菌株。
保存期限:可长期保存,一般可达 10 年以上。
注意事项:冷冻干燥过程需要专业的设备,操作要严格按照规程进行。保存过程中要防止干燥后的菌株吸潮。
在保存 ATCC 菌株时,需要详细记录菌株的信息,包括菌株名称、ATCC 编号、保存日期、保存条件等。同时,定期对保存的菌株进行检查和复苏培养,以确保菌株的活性和特性稳定。

以下是一些 ATCC 的保藏资源在药物研发中的成功案例:
肿瘤药物研发:在研发治疗肺癌的新型小分子靶向药物时,科研人员利用 ATCC 的肺癌细胞系 A549 进行药物敏感性实验。通过将不同浓度的药物作用于 A549 细胞,观察细胞的生长抑制情况、凋亡率变化以及相关信号通路蛋白的表达水平,以此评估药物的疗效和作用机制,为后续药物的临床前研究提供重要依据。
神经退行性疾病药物研发:针对阿尔茨海默病,研究人员使用 ATCC 的神经元细胞系,如 SH - SY5Y 细胞,建立疾病模型。通过诱导细胞产生 β - 淀粉样蛋白沉积和 tau 蛋白过度磷酸化等病理特征,筛选能够改善这些病理变化的药物,为寻找治疗阿尔茨海默病的有效药物提供细胞水平的实验支持。
助力疫苗生产中的宿主细胞残留检测:在流感疫苗的生产过程中,通常使用 MDCK 细胞作为宿主细胞。为了确保疫苗的安全性,需要对疫苗中的残留 MDCK 细胞基因组 DNA 进行检测。ATCC 与 USP 合作开发的定量 MDCK 基因组 DNA 标准品,可用于验证定量 PCR(qPCR)检测方法的准确性和可靠性。通过将已知浓度的标准品加入到疫苗样品中,进行 qPCR 检测,建立标准曲线,从而准确测定疫苗中残留 MDCK 细胞基因组 DNA 的含量,确保其符合监管要求。
支持生物药生产中的宿主细胞残留检测:对于使用 HEK - 293 细胞生产的重组蛋白药物,ATCC 的 HEK - 293 基因组 DNA 标准品可用于检测药物生产过程中残留的宿主细胞 DNA。在药物纯化过程的各个阶段,使用该标准品对 qPCR 检测方法进行校准和验证,及时监测并控制残留 DNA 的水平,保证生物药的质量和安全性。

菌种的培育和复苏是微生物学实验和应用中的重要环节,以下分别介绍其一般步骤:
菌种培育
培养基制备
根据所培养菌种的营养需求,选择合适的培养基配方。例如,培养细菌常用牛肉膏蛋白胨培养基,培养真菌可用马铃薯葡萄糖培养基。
准确称量各成分,溶解于适量蒸馏水中,调节 pH 值至适宜范围。如细菌培养基一般 pH 值在 7.0 - 7.5,真菌培养基 pH 值在 5.0 - 6.0。
分装到培养容器中,如试管、三角瓶等,进行高压蒸汽灭菌。一般在 121℃,103.4kPa 条件下灭菌 15 - 20 分钟。
接种
在无菌条件下,采用适当的接种方法将菌种接入培养基。常用的接种方法有平板划线法、涂布平板法、穿刺接种法等。
平板划线法是用接种环蘸取少量菌液,在平板培养基表面连续划线,使菌种分散,经培养后形成单个菌落。涂布平板法是将菌液均匀涂布在平板培养基表面,适用于需计数的菌种。穿刺接种法是用接种针将菌种穿刺接入固体培养基中,常用于保存厌氧菌种或观察细菌的运动性。
培养
根据菌种的特性,选择适宜的培养条件,包括温度、湿度、光照和气体环境等。如大肠杆菌一般在 37℃培养,而霉菌通常在 25 - 28℃培养。
需氧菌一般在有氧条件下培养,可采用摇床培养或静置培养。厌氧菌则需在无氧环境中培养,可使用厌氧培养箱或厌氧袋等设备。
菌种复苏
准备工作
查阅菌种的相关资料,了解其特性、保存条件和复苏方法。
准备好所需的培养基、培养设备以及无菌操作工具等。
取出菌种
从低温保存设备(如冰箱、液氮罐等)中取出保存的菌种。如果是冷冻干燥保存的菌种,需先在室温下放置片刻,使其恢复至室温。
接种培养
对于冷冻保存的菌种,可直接将菌种接种到适宜的培养基上。如果是冷冻干燥保存的菌种,需先加入适量的无菌水或培养基,轻轻振荡使其溶解,然后再接种到培养基上。
按照菌种的培养要求,将接种后的培养基置于合适的培养条件下进行培养。在培养过程中,要密切观察菌种的生长情况,如出现污染或生长异常,应及时采取措施。
不同种类的菌种在培育和复苏过程中可能会有一些特殊要求和注意事项,需要根据具体菌种的特性进行操作,以确保菌种的活性和纯度。

除了 ATCC,以下是一些类似的保藏中心及其应用:
欧洲典型培养物保藏中心(ECACC):是欧洲重要的细胞库之一。其细胞系涵盖癌症、遗传疾病及转基因研究等领域,支持欧洲和全球科研机构。它强调可追溯性和质量控制,为科研提供高质量的细胞资源,可用于基础生物学研究、药物研发、疾病模型构建等。例如在癌症研究中,提供的癌细胞系可用于研究癌症的发生发展机制、筛选抗癌药物等。
日本细胞资源保藏中心(JCRB):专注于亚洲人群相关的细胞系,以癌症和人类疾病相关的细胞系为主,提供多样的癌症研究细胞资源以及人类疾病模型细胞,资源的生物信息学支持非常强大。可用于针对亚洲人群疾病特点的研究,如在研究亚洲人群高发的胃癌、肝癌等疾病时,利用其保藏的相关细胞系建立疾病模型,探索疾病的发病机制、寻找诊断标志物和治疗靶点等。
德国微生物与细胞培养物保藏中心(DSMZ):是欧洲历史悠久且种类丰富的细胞库,以肿瘤研究细胞系的丰富性及质量可靠性著称,尤其在白血病和淋巴瘤相关细胞系上非常全面,同时还提供微生物资源。在肿瘤研究中,为白血病和淋巴瘤等疾病的基础研究、药物研发提供了重要的细胞模型,有助于深入了解疾病的病理生理过程,开发针对性的治疗药物。此外,其微生物资源也可用于微生物学、生物技术等领域的研究。
韩国细胞系银行(KCLB):是韩国最大的细胞库,拥有丰富的韩国人群相关的细胞系,并支持亚洲遗传背景下的研究,尤其在药物筛选和基因组学研究方面得到广泛应用。在药物研发中,利用韩国人群相关细胞系进行药物筛选,可更好地模拟药物在亚洲人群中的作用效果,提高药物研发的成功率。同时,在基因组学研究中,为揭示亚洲人群遗传特征与疾病的关系提供了重要的细胞资源。
中国科学院典型培养物保藏委员会(CGMCC):是中国最大的生物资源中心,涵盖细胞系和微生物资源。专注于中国本土资源的收集和保存,尤其是中国人相关的细胞系和传统中药相关研究样本,促进本地化的生物医学研究。在中药研究方面,其保存的与传统中药相关的微生物资源可用于研究中药的发酵炮制、中药活性成分的生物转化等。对于中国人相关细胞系的研究,有助于深入了解中国人群疾病的遗传基础和发病机制,为个性化医疗提供支持。
中国食品药品检定研究院(NIFDC):是国家级药物检测和生物资源中心,提供药物研发、毒理学和质量控制研究所需的细胞系,严格遵循中国药品审评标准,资源主要用于药物临床试验和生产监督。在药物研发过程中,为药物的安全性评价、有效性验证提供细胞模型,确保药物符合质量标准和审评要求。例如,在新药的毒理学研究中,利用其提供的细胞系进行药物毒性测试,评估药物对不同细胞类型的影响,为临床用药的安全性提供依据。
法国巴斯德研究所(Pasteur Institute Cell Bank):历史悠久,擅长微生物学、免疫学和传染病研究的资源库,特别是与病毒感染相关的细胞系,在疫苗研发和传染病防控领域有重要影响。在传染病研究和疫苗研发中,提供的病毒感染相关细胞系可用于研究病毒的感染机制、病毒与宿主细胞的相互作用等,为开发有效的疫苗和治疗方法提供关键的实验模型。例如,在研发流感疫苗、新冠疫苗等过程中,利用相关细胞系进行病毒培养、疫苗抗原筛选和免疫原性评估等工作。

零下20℃冰箱一般不适合用于长期保存 ATCC 菌株。虽然 - 20℃冰箱可用于短期保存某些菌株,但长期保存可能会导致菌株活力下降、基因突变等问题,原因如下:
冰晶损伤:在 - 20℃条件下,菌株细胞内的水分仍有可能形成较大的冰晶,这些冰晶会破坏细胞的结构,如细胞膜、细胞器等,从而影响菌株的活力和生理特性。随着时间的推移,这种损伤会逐渐积累,导致菌株的存活率降低,甚至可能使菌株失去某些关键的生物学功能。
生化反应仍可发生:-20℃并不能完全抑制所有的生化反应。菌株细胞内的一些酶仍然可能具有一定的活性,从而引发细胞内的代谢反应。这些反应可能会消耗细胞内的营养物质,产生一些对细胞有害的代谢产物,进而影响菌株的长期生存。
稳定性问题:-20℃冰箱的温度稳定性相对较差,容易受到外界环境因素的影响,如冰箱门的开关、电源波动等。温度的波动可能会导致菌株经历反复的冻融过程,即使是微小的温度变化也可能对菌株造成损害,进一步降低菌株的存活率和稳定性。
相比之下,-80℃冰箱或液氮罐等低温保存条件能够更好地抑制冰晶形成和生化反应,提供更稳定的保存环境,更适合 ATCC 菌株的长期保存。


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关键词:ATCC23904标准菌株,ATCC43699标准菌株,ATCC35866标准菌株,ATCC31800标准菌株