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人14-3-3蛋白酶联免疫试剂盒

面议元2022-11-04 21:17:24

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董奕

注册时间:2020-04-07

信息详情

人14-3-3蛋白酶联免疫试剂盒?

【工作原理】

14-3-3是一个丰富的广泛表达的蛋白家族,是一个可以自发聚集成二聚体的多功能蛋白质。初在脑脊液提取物中检测出14-3-3蛋白的相对高丰度。14-3-3广泛分布于从植物到哺乳动物等所有真核生物中,哺乳动物有7种异构体,大部分以同源或异源二聚体形式存在于细胞质中,与多种细胞蛋白结合并相互作用。14-3-3以稳定的同源/异源二聚体形式聚集在一起,能同时结合两个配体。所有14-3-3的三级结构都极其相似,哺乳动物14-3-3蛋白是由两个单体连接形成的杯状二聚体结构,每个单体由9个α螺旋(αA~αI)组成,反向平行排列成L型结构,彼此间被一短环间隔,其中αC和αD的氨基酸序列长(30~34个氨基酸残基),它们跨越整个单体并连接形成一个卷曲的螺旋结构。二聚体界面由一个单体的αA与另一个单体的αC和αD构成,其中含有疏水性残基和极性残基,形成高度保守的兼性沟槽。所提供的ELISA Kit是典型的夹心法酶联免疫吸附测定试剂盒(ELISA)。预先包被的人14-3-3蛋白人14-3-3蛋白抗体为单克隆人14-3-3蛋白人14-3-3蛋白抗体,检测相人14-3-3蛋白人14-3-3蛋白抗体为多克隆人14-3-3蛋白人14-3-3蛋白抗体,经生物素(biotin)标记。样品和生物素标记人14-3-3蛋白人14-3-3蛋白抗体先后加入酶标板孔反应后,PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应;经过PBS或TBS的彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子呈正相关。人14-3-3蛋白酶联免疫试剂盒?

【每套试剂盒中内容】(96T)

材料 数量

人14-3-3蛋白标准品 96T(2vial)

预包被人14-3-3蛋白人14-3-3蛋白抗体的96孔板 96T( 8×12)

生物素标记人14-3-3蛋白人14-3-3蛋白抗体 96T(1:100)

ABC(过氧化物酶标记亲和素) 96T(1:100)

样品稀释液 96T

人14-3-3蛋白人14-3-3蛋白抗体稀释液 96T

ABC稀释液 96T

TMB显色液A 96T

TMB显色液B 96T

TMB终止液 96T

ELISA专用洗涤液 96T(1:25)【需要而未提供的试剂和器材】

1. 37℃恒温箱。

2. 标准规格酶标仪。

3. 自动洗板机。

4. 单通道或多通道可调节移液器以及其吸头。

5. 蒸馏水,容量瓶等

6. 干净的试管和Eppendof管。人14-3-3蛋白酶联免疫试剂盒?

【注意事项】

1. 开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。

2. 配制各种试剂时,切记混匀!

3. 用户在初次使用试剂盒时,应将各种试剂管离心数分钟,以便试剂集中到管底。

4. 建议所有人14-3-3蛋白标准品、样本都做双份检测。

5. 要严格避免操作过程中酶标板干燥。干燥会使酶标板上生物成份迅速失活!

6. 为免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和试管。【洗板方法】

手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将推荐的PBS或TBS洗涤缓冲液至少0.35ml注入孔内,浸泡1-2分钟。根据需要,重复此过程数次。

自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。【样品的准备和保存】

样品如果不立即分析,应分装后冷冻保存,且避免反复冻融。

血清——用干净试管收集血液,室温凝固2小时或4℃过夜,离心1000×g 10分钟,收集血清。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。

细胞培养、组织匀浆、脑脊液、体液——离心去除沉淀,立即分析或分装后-20℃冷冻保存。【样品稀释的一般原则】

用户须查阅文献了解标本内待测因子的含量,决定适当的稀释倍数,以使稀释后样品中待测因子的浓度处于ELISA试剂盒的佳检测范围。样品的稀释应有详细记录。【试剂的准备和保存】

A. 人14-3-3蛋白标准品的稀释和使用:在使用前2小时内准备。将冻干品管内加入500ul样品稀释液,彻底溶解后取出250ul加入到750ul样品稀释液中,混匀后做倍比稀释。

稀释后的人14-3-3蛋白标准品在2小时内使用。B.生物素标记人14-3-3蛋白人14-3-3蛋白抗体工作液:在使用前2小时

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