Fluo-4, AMCAS#：273221-67-3中文名：钙荧光探针 Fluo-4, AM分子式：C51H50F2N2O23分子量：1096.94性质：1. 外观：橙红色粉末2. 纯度：≥90%（HPLC）3. 产品描述： Fluo-4 是一种将 Fluo-3 结构中的 Cl 替换成 F 的钙荧光探针。由于将 Cl 替换成了电子吸引力更强的 F，它的大激发波长会向短波长处偏离 10 nm 左右。这个波长更接近于氩激光器的波长，所以用氩激光器激发时，Fluo-4 的荧光强度比 Fluo-3 强一倍。Fluo-4, AM 穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯酶剪切形成 Fluo-4，从而被滞留在细胞内，Fluo-4 若以游离配体形式存在时几乎是非荧光性的，但是当它与细胞内钙离子结合后可以产生较强的荧光，大激发波长为 494nm，大发射波长为 516nm。可以使用激光共聚焦显微镜或流式细胞仪检测细胞内钙离子浓度的变化。4. 操作说明（for Human T cells）*（1） 试剂

2 mM 的 Fluo-4, AM/DMSO（将 1mg Fluo-4, AM 溶于 442µL DMSO） Pluronic F127

Hanks•balanced salt solution（HBSS）HEPES buffer saline（10mM HEPES，1mM Na2HPO4，137mM NaCl，5mM KCl，1mM CaCl2， 0.5mM MgCl2，5mM glucose，0.1% BSA，pH 7.4）(2） 操作①. 向Fluo-4, AM/DMSO 溶液中加入16.5mg Pluronic F127，Pluronic F127 可以 防止Fluo-4, AM 在 HBSS 中聚合并能帮助其进入细胞。②. 用 HBSS 稀释 Fluo-4, AM 溶液，制备 4µM 的 Fluo-4, AM 工作液。 ③. 将 Fluo-4, AM 工作液加入细胞，在 37℃培养 20 分钟。④. 加入 5 倍体积的含有 1%胎牛血清的 HBSS，再继续培养 40 分钟。⑤. 用HEPES buffer saline 洗涤细胞3 次，然后用HEPES buffer saline 使细胞重悬浮，制成1×105cells/mL 的溶液。⑥. 37℃下培养 10 分钟，然后用该细胞进行荧光钙离子检测。激发波长 494nm，发射波长

516nm。

*标记的条件因细胞种类而异，在每次实验前，请先确定佳条件。以上方法仅供参考。 储存条件：-20℃干燥避光保存，有效期一年。